Vi sinh vật bao gồm các sinh vật đơn bào có kích thước vài micro mm. Ba loại vi khuẩn thường gặp ở người là mycobacterium tuberculosis, mycobacterium leprae và helicobacter pylori.

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Mycobacterium tuberculosis gây bệnh lao, không di động và có hình que, đồng thời được đặc trưng và xác định bởi một đặc tính được gọi là “axit nhanh”, nghĩa là sau khi hấp thụ, thuốc nhuộm dùng để nhuộm trực khuẩn sẽ không bị loại bỏ khi ủ trong nước rửa axit. Phương pháp nhận dạng phổ biến là nhuộm AFB, hay còn gọi là nhuộm vi khuẩn kháng axit.

Axit mycolic là cơ chế chịu trách nhiệm về đặc tính kháng axit. Thành của vi khuẩn tạo ra chất sáp gọi là axit mycolic. Axit này liên kết với các chất trong thành tế bào của vi khuẩn, khiến chúng có khả năng chống lại sự mất màu khi xử lý bằng axit-cồn. Các lựa chọn nhuộm AFB phổ biến nhất là carbol fuchsin của Kinyouin hoặc carbol fuchsin của Ziehl-Neelsen. Các giải pháp, kết quả đều giống nhau đối với cả hai.

Kinyouin’s Carbol Fuchsin

Quy trình

Kết quả

Cách thức

Thời gian ủ có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất

Xử lý vết nhuộm AFB:

Điều quan trọng là phải rửa sạch sau khi sử dụng carbol fuchsin để loại bỏ dung dịch dư thừa. Đảm bảo nước bao phủ toàn bộ tiêu bản, vết nhuộm còn sót lại có thể sọc qua mô làm ảnh hưởng đến kết quả. Quá trình khử màu sẽ diễn ra nhanh chóng. Ủ trong HCL/70% EtOH đến khi sạch lam kính và mô trông hơi hồng. Sau khi khử màu, rửa thật kỹ, đảm bảo không để lại axit/EtOH trên lam kính. Với xanh methylene, càng ít càng tốt. Nếu bạn nhuộm quá mức chất phản ứng này, trực khuẩn AFB có thể bị che khuất. Nếu quá ít, tất cả có thể bị trôi đi, không để lại độ tương phản.

Như đã nêu ở trên, xanh methylene có thể bị rửa trôi nhanh chóng trong cồn, vì vậy hãy đảm bảo loại bỏ nước hoàn toàn  ra khỏi tiêu bản.

MYCOBACTERIUM LEPRAE

Gây bệnh phong, có đặc tính kháng axit tương tự như M. Tuberculosis nhưng kém hiệu quả hơn nhiều. Thuốc nhuộm phổ biến để nhận dạng là Fite’s Faraco.

Fite’s Faraco

Quy trình

Kết quả

Cách thức

Thời gian ủ có thể khác nhau tùy theo nhà sản xuất

Warthin Starry Silver

Quy trình

Kết quả 

Cách thức

Thời gian ủ có thể thay đổi theo hướng dẫn của nhà sản xuất

Lưu ý:  Thuốc nhuộm Warthin Starry Silver được sử dụng để phát hiện nhiều loại vi sinh vật khác nhau, không chỉ H. Pylori. Vì lý do này, bạn có thể tìm thấy các cách thức khác với giao thức dành riêng cho H. Pylori bên dưới.

Giemsa là một loại thuốc nhuộm đa sắc được tạo thành từ thuốc nhuộm có màu sắc khác nhau.