Nhuộm ghép đa kênh là một công cụ quan trọng để phát hiện đồng thời nhiều kháng thể trong một lát cắt mô duy nhất
Chọn màu sắc chromoge cho nhuộm ghép đa kênh
Nếu đã chọn nhuộm ghép đa kênh sinh màu chromogenic, có những điểm bổ sung cần cân nhắc: lựa chọn màu sắc và thứ tự áp dụng màu. Video dưới đây sẽ cung cấp một số tips cần cân nhắc khi sử dụng chất tạo màu chromoge
10 tips thực hiện nhuộm ghép đa kênh
Phương pháp nhuộm nhuộm ghép đa kênh sinh màu chromogenic cần được lên kế hoạch và cân nhắc cẩn thận để tạo ra một tiêu bản nhiều màu, nhiều kết quả, lâu dài, có khả năng ngăn tình trạng tẩy quang và vượt trội cho hình ảnh trường sáng và phân tích tiếp theo.
Cân nhắc sử dụng màu sắc nhạt hơn
- Màu sắc nhiễm sắc thể nhạt hơn có thể dễ hình dung hơn, đặc biệt là khi có nhiều loại nhiễm sắc thể
Tối ưu hóa trình tự nhiễm sắc thể
- DAB có thể nhuộm quá mức và khuất các vị trí đã nhuộm trước đó. Hãy cân nhắc vị trí thích hợp trong xét nghiệm.
Xem xét lựa chọn màu nhuộm theo sở thích
- Đảm bảo thuốc nhuộm đối lập tạo ra độ tương phản thích hợp và không ảnh hưởng đến quá trình diễn giải sắc tố.
Xem xét khả năng tương thích của các chromogen
- Hãy cân nhắc đến khả năng tương thích của chromogen đã chọn với môi trường dán lam cần thiết và phương pháp khử nước.
Xem xét thứ tự đánh dấu kháng thể
- Xác định kháng nguyên nào mạnh mẽ hoặc dễ bị phân hủy sau nhiều vòng thu hồi kháng nguyên
Kiểm tra độ ổn định của các chromogen khác nhau
- Sử dụng chromogen có tín hiệu mạnh ở giai đoạn đầu của xét nghiệm và tín hiệu yếu hơn ở giai đoạn sau của thí nghiệm.
Cân nhắc lựa chọn màu sắc chromogen
- Trước tiên, hãy cân nhắc lựa chọn màu sắc chromogen cho các đối tượng gần hơn về mặt không gian, sau đó mới tiến hành thí nghiệm tiếp theo.
Xem xét tốc độ kết tủa sắc tố
- Các chromogen kết tủa nhanh hơn có thể phù hợp hơn với các protein biểu hiện thấp. Cân nhắc các chromogen kết tủa chậm hơn cho các protein biểu hiện cao.
Xem xét biểu hiện cao so với thấp
- Cân nhắc sử dụng màu chromogen mạnh cho biểu hiện thấp hoặc các dấu hiệu số lượng thấp. Tiếp theo là màu chromogen yếu hơn cho biểu hiện cao hoặc các dấu hiệu số lượng cao.
Xem xét sự kết hợp màu sắc
- Đối với các kháng thể cùng vị trí, sử dụng các chromogen có thể tạo ra màu thứ ba khi kết hợp.
Hệ thống phát hiện cho kỹ thuật nhuộm ghép đa kênh
Có nhiều quyết định phải đưa ra khi áp dụng nhuộm ghép đa kênh, chẳng hạn như lựa chọn nhuộm ghép đa kênh sinh màu hoặc miễn dịch huỳnh quang, cũng như thứ tự và màu sắc của chất sinh màu và chất huỳnh quang. Tuy nhiên, các quyết định không dừng lại ở đó vì có nhiều hệ thống phát hiện khác nhau dành cho xét nghiệm nhuộm ghép đa kênh có thể tăng độ nhạy và cải thiện tỷ lệ tín hiệu nhiễu khi phát hiện các kháng thể quan tâm. Một số ví dụ được trình bày trong video sau:
Khi không không chắc chắn về hệ thống phát hiện nào có sẵn cho các xét nghiệm nhuộm ghép đa kênh? Hãy xem thông tin bên dưới để biết một số ví dụ về hệ thống xác định có sẵn cho các xét nghiệm nhuộm ghép đa kênh có thể tăng độ nhạy và cải thiện tỷ lệ tín hiệu nhiễu khi xác định các kháng thể quan tâm.
Hệ thống nhuộm ghép đa kênh
Có một số hệ thống xác định kháng nguyên có sẵn để biểu hiện nhuộm ghép đa kênh: phát hiện kháng thể chính trực tiếp hoặc phát hiện gián tiếp bằng ABC, kháng thể liên kết với polyme, có hoặc không có khuếch đại tyramide và cuối cùng là kháng thể chính được gắn nhãn oligonucleotide với đầu dò bổ sung. Bất kỳ hệ thống xác định nào trong xét nghiệm nhuộm ghép đa kênh thì việc tối ưu hóa là rất quan trọng.
Phát hiện trực tiếp
- Thích hợp cho các protein được biểu hiện cao
- Có thể tránh phản ứng chéo bởi kháng thể thứ cấp đặc hiệu loài
Phát hiện gián tiếp
Hệ thống phát hiện khuếch đại tín hiệu Tyramide
Nội dung bởi: Rhian Evans,
Nguồn:
EN