Tinh sạch protein với Avanti JXN

Protein tinh khiết cần thiết cho nhiều ứng dụng nghiên cứu protein như tinh thể học tia X, NMR, thông số khối lượng và xét nghiệm sinh hóa trong ống nghiệm. Protein có thể được phân lập từ mô hoặc thường xuyên hơn bằng cách biểu hiện quá mức của chúng trong cơ thể sinh vật, như vi khuẩn, nấm men hoặc tế bào động vật có vú trong nuôi cấy. Các đặc điểm riêng của mỗi protein, như thành phần axit amin, kích thước, hình dạng, điểm đẳng điện và độ hòa tan được sử dụng để phát triển các chiến lược riêng biệt để phân lập protein quan tâm. Mục tiêu là cô lập lượng protein chức năng quan tâm lớn nhất với lượng chất gây ô nhiễm khác ít nhất hiện diện.

Ly tâm là bước quan trọng và thường là bước đầu tiên trong quy trình tinh sạch protein. Dòng Avanti JXN có sẵn một loạt rôto để hỗ trợ bất kỳ giai đoạn tinh sạch protein nào. Nhiều lựa chọn rôto với sự kết hợp khác nhau về thể tích và lực g khiến nó trở thành một thiết bị linh hoạt có khả năng đáp ứng nhu cầu của bất kỳ phòng thí nghiệm nghiên cứu protein nào. Nó là một giải pháp tuyệt vời cho các ứng dụng proteomics khác nhau như tạo hạt tế bào, kết tủa protein, phân lập dưới tế bào và màng, gradient mật độ và nồng độ protein.

1. Thu thập: Tách mẫu mà từ đó protein cần được tinh sạch (ví dụ: tế bào vi khuẩn, tế bào côn trùng, tế bào hoặc mô động vật có vú, v.v.) là bước đầu tiên trong quá trình tinh sạch protein. Bước này thường yêu cầu rôto tốc độ thấp nhưng dung tích lớn. Dòng Avanti JXN có cố định JLA-8.1000/JLA-9.1000/JLA-10.500 cho dung tích lên đến 6 lít, điều này có thể hỗ trợ việc này. Rôto dòng chảy liên tục JCF-Z có thể được sử dụng cho khối lượng ép viên cao hơn cần thiết trong quá trình thiết lập xử lý sinh học.
2. Làm rõ chất ly giải: Sau khi tế bào được tạo thành từng phần và ly giải, bước quan trọng thứ hai trong quá trình tinh sạch protein là tách hiệu quả protein khỏi các thành phần phi protein và mảnh vụn của tế bào. Bước này sử dụng quá trình làm rõ tốc độ chjao. Rôto cần thiết cho bước này là rôto tốc độ cao, âm lượng thấp. Dòng Avanti JXN có nhiều rôto khác nhau như JA-25.15, JA-25.50 và JA-30.50 Ti có thể đạt trên 100.000 xg cần thiết cho bước này.
3. Tinh sạch thô: Các bước kết tủa sử dụng chất kết tủa như amoni sunfat, polyetylen glycol, v.v., giúp thu hồi protein khối lượng lớn từ dịch chiết thô và được sử dụng làm phương pháp tinh sạch sơ cấp. Việc tách các kết tủa này đòi hỏi tốc độ trung bình và rôto có thể tích từ thấp đến trung bình. Dòng Avanti JXN có các rôto như JA-17, JA-18, JA-20 và JLA-16.250 mang đến sự kết hợp phù hợp giữa tốc độ và công suất cho bước này.
4. Cột sắc ký: Quá trình tinh sạch thứ cấp của protein mục tiêu thường dựa trên các nguyên tắc sắc ký khác nhau như ái lực, trao đổi ion, kỵ nước, loại trừ kích thước, v.v. Cột quay máy ly tâm siêu nhỏ và bộ dụng cụ 96 giếng giúp tinh sạch một lượng nhỏ protein tái tổ hợp một cách nhanh chóng và đơn giản. thái độ. Những cột này hoàn hảo để sàng lọc trước các điều kiện sắc ký lý tưởng cũng như protein hiệu suất cao. Rôto JS-5.3 và JS-5.9 có thể được sử dụng cho cột chuẩn bị protein định dạng 96 giếng.
5. Mật độ gradient: Mật độ gradient thường được sử dụng để phân lập các cơ quan dưới tế bào như ty thể, màng sinh chất, v.v., từ đó cần phân lập một protein cụ thể. Mật độ gradien cũng được sử dụng như bước tinh sạch bậc ba để chuẩn bị protein. Rôto JS-24.15 và JS-24.38 có thể được sử dụng cho cả mật độ gradien đẳng áp và vùng tốc độ.
6. Trao đổi đệm và nồng độ: Đối với bất kỳ xét nghiệm proteomics nào, điều bắt buộc là phải có dung dịch đệm và nồng độ phù hợp của protein nguyên chất. Có nhiều cột dựa trên bộ lọc khác nhau được sử dụng để trao đổi đệm cũng như nồng độ protein. JS-4.0, JS-4.3 và JS-5.3 có sẵn nhiều bộ điều hợp cho các bộ tập trung này.

Lưu ý: Tốc độ và dung tích tối đa có thể thay đổi tùy theo bộ chuyển đổi, dụng cụ thí nghiệm và mẫu thiết bị.

Nguồn:

Minh Khang là nhà nhập khẩu và phân phối trực tiếp máy ly tâm tốc độ cao hãng Beckman Coulter.